本文隸屬于不溶性微粒應用專題，全文共 3232字，閱讀大約需要 9 分鐘

摘要：隨著眼科給藥技術(shù)的不斷發(fā)展與監(jiān)管體系的國際化接軌，2025年版《中國藥典》（ChP）四部正式新增了<3903> 生物制品眼內(nèi)注射劑不溶性微粒檢查法專章^[1]。在過去，我國藥典雖然對靜脈注射劑的不溶性微粒檢測有明確規(guī)范（如通則<0903>）^[2]，但并未針對眼內(nèi)組織這一極度敏感的給藥途徑設(shè)立獨立標準。新增的<3903>專章補了這一空白，專門適用于注射部位為玻璃體內(nèi)、前房內(nèi)、視網(wǎng)膜下、脈絡(luò)膜上腔等眼內(nèi)組織的生物制品注射劑，加強了對生物制品眼內(nèi)注射劑的安全性控制。

關(guān)鍵詞：不溶性微粒；眼內(nèi)注射劑；2025年版《中國藥典》；ChP<3903>

人體的眼內(nèi)組織（尤其是玻璃體和視網(wǎng)膜）是一個微小且高度封閉的空間。區(qū)別于靜脈注射中的微?？呻S血液循環(huán)在全身分布或被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，注入眼內(nèi)的不溶性微粒可能在局部滯留或蓄積，產(chǎn)生長期的健康危害。

近年研究表明，眼內(nèi)注射液中哪怕是微小的不溶性微粒（如來源于包材脫落、硅油微滴或因物理作用產(chǎn)生的蛋白質(zhì)聚集體），也可能引發(fā)嚴重的眼部并發(fā)癥^[6-8]。過量微粒在眼內(nèi)可能導致無菌性眼內(nèi)炎癥、飛蚊癥、眼壓升高（進而增加青光眼風險），甚至刺激眼內(nèi)細胞介導的免疫反應。特別是在生物大分子藥物（如抗VEGF單抗、融合蛋白）給藥中，硅油微滴等界面可能促進蛋白吸附、構(gòu)象變化和聚集，從而增加潛在免疫原性風險。因此，對眼內(nèi)注射液的不溶性微粒實施區(qū)別于普通注射劑的專屬性管控，是保障患者視力與用藥安全的重要措施。

圖1：眼內(nèi)注射與靜脈注射的微粒暴露差異示意圖

<3903>與<0903>均以光阻法為第一法、顯微計數(shù)法為第二法。以下從檢查用水、取樣方式、限度和方法適用性等方面，將<3903>與通則<0903>及最新版USP <789>進行對比。需要注意的是，USP <789>自2024年5月1日起已更名為“Subvisible Particulate Matter in Intraocular Solutions（眼內(nèi)溶液中亞可見微粒）"，適用定位更明確。^[3]

原有的通則<0903>要求光阻法所用微粒檢查用水在25mL中含10μm及以上微粒不超過25粒、25μm及以上不超過5粒。而<3903>不僅繼承了上述水質(zhì)要求，還特別增加了一條“一票否決"的紅線要求——檢查用水不得含有50μm及50μm以上的微粒。這要求實驗室在水系統(tǒng)維護和前端過濾除雜上必須采取管控措施。

眼內(nèi)注射液由于給藥途徑的特殊性，通常裝量極小且生物藥物成本高昂。

在通則<0903>中，對于標示裝量低于25 mL的制劑，可取至少4個供試品并確?？傮w積不少于25 mL；采用合并檢測路徑時，則需合并至少10個供試品的內(nèi)容物至不少于25 mL，每次取樣不少于5 mL。<3903>針對眼內(nèi)注射液的低裝量特點，要求在潔凈工作臺小心合并至少4個供試品的內(nèi)容物至適宜體積，輕柔混勻后靜置2分鐘或適當時間脫泡，再置于取樣器上，不加攪拌或轉(zhuǎn)動，依法至少測定4次，每次進樣體積不少于1 mL；棄去第一次測定數(shù)據(jù)，取后續(xù)3次測定數(shù)據(jù)的平均值作為測定結(jié)果。

這一改動降低了單次檢測所需進樣的體積門檻，在保留重復測量要求的同時，降低樣品消耗，避免了為湊夠大檢測體積而浪費大量昂貴生物樣本或過度稀釋導致結(jié)果失真的問題。

<3903>的光阻法限度與USP <789>采用相同的三個關(guān)鍵粒徑閾值。對比內(nèi)容如下表所示：

注：此處僅選擇<0903>中按mL計數(shù)的大容量注射液限度進行同單位比較；小容量普通注射劑按每容器判定，不能直接作數(shù)值嚴寬比較

從表中可見，<3903>與USP <789>在≥10 μm、≥25 μm和≥50 μm三個閾值上的限度一致。與<0903>針對大容量注射液的限度相比，<3903>在10 μm和25μm相應限度數(shù)值高于<0903>大容量注射液限度，但新增了≥50 μm不得超過2粒/mL的控制。因此，其監(jiān)管重點是針對眼內(nèi)給藥風險建立專屬性限度和低裝量檢測程序。

USP <789>現(xiàn)行章節(jié)名稱為《眼內(nèi)溶液中亞可見微粒》，該章要求眼內(nèi)溶液按<790>進行目視檢查，達到基本無可見微粒，并按照<789>規(guī)定的方法和限度控制亞可見微粒。其光阻法限度為：≥10 μm不超過50粒/mL、≥25 μm不超過5粒/mL、≥50 μm不超過2粒/mL。USP在2025年修訂提案的說明中進一步澄清：章節(jié)取消強制的兩階段檢測，是為了給企業(yè)更多方法選擇；先做光阻法、必要時再以顯微計數(shù)法確認的“兩階段"路徑仍然可接受，企業(yè)可依據(jù)產(chǎn)品特性和方法適用性選擇方案。^[3-4]

與USP<789>和《中國藥典》<3903>設(shè)置眼內(nèi)制劑專屬性限度的思路不同，JP XIX并未設(shè)置與USP<789>對應的眼內(nèi)注射液亞可見微粒專章，而是將注射劑統(tǒng)一納入一般試驗法<6.07>“注射劑的不溶性微粒子試驗法"進行管理。該體系重點控制≥10 μm和≥25 μm微粒，并根據(jù)裝量按每毫升或每容器進行判定；對于低裝量或蛋白類注射劑，則強調(diào)小體積測量準確性、合理合并樣品和避免氣泡，并明確蛋白注射劑不宜采用超聲脫泡。JP XIX同時刪除了原<6.17>“蛋白質(zhì)醫(yī)藥品注射劑的不溶性微粒子試驗法"，相關(guān)要求已整合至修訂后的<6.07>。需要注意的是，日本藥典<6.08>“點眼劑的不溶性微粒子試驗法"主要適用于點眼液，不應直接作為玻璃體內(nèi)、前房內(nèi)等眼內(nèi)注射劑的判定依據(jù)。因此，與USP<789>及《中國藥典》<3903>相比，日本藥典目前在通用章節(jié)層面并未另設(shè)“≥50 μm不超過2粒/mL"的眼內(nèi)注射專屬性限度，而是以注射劑通用要求、具體品種標準及產(chǎn)品風險評估共同實施控制。^[5]

眼內(nèi)注射領(lǐng)域?qū)Σ蝗苄晕⒘５年P(guān)注具有鮮明的專屬性。Dounce等直接研究玻璃體內(nèi)注射用抗VEGF藥物的轉(zhuǎn)移注射器和預灌封注射器，發(fā)現(xiàn)硅化胰島素注射器顆粒負荷較高；不同潤滑體系、藥液與注射器接觸時間、儲存和振蕩均會改變最終注入玻璃體的顆粒水平。^[6] Melo等還證實，臨床常用注射器在彈擊或振動后可能釋放更多硅油微滴，建議眼內(nèi)注射前避免彈擊或劇烈振蕩，并優(yōu)先評估低硅油或無硅油給藥系統(tǒng)。^[7] 因此，眼內(nèi)制劑的顆粒控制不應只考察“灌裝結(jié)束時的藥液"，而應覆蓋容器密閉系統(tǒng)、針具、分裝/轉(zhuǎn)移過程、運輸振動和貨架期末的完整給藥鏈條。

圖2：眼內(nèi)注射劑中潛在微粒的來源示意圖

眼內(nèi)注射生物制品常同時具有低裝量、高價值、較高黏度、易起泡和蛋白易聚集等特點。其檢測難點首先來自樣品量：<3903>將單次進樣降至不少于1 mL，使方法能夠適配低裝量眼內(nèi)制劑，但與此同時，管路死體積、棄樣、體積準確度和單個氣泡造成的相對誤差都會被放大。其次，蛋白聚集體、硅油微滴與外源固體顆?？赡芡瑫r存在，而光阻法只能按光學等效粒徑計數(shù)，不能直接判斷顆粒來源；異常結(jié)果應結(jié)合顯微計數(shù)或流動成像等正交技術(shù)調(diào)查。再次，樣品若經(jīng)劇烈振蕩、快速抽吸或反復推拉，既可能形成氣泡，也可能促使硅油脫落及蛋白聚集，從而使檢測過程本身改變被測樣品。^[6-8]

圖3：較高黏度樣品移取操作示意（圖片來源：CDC / Unsplash，依據(jù) Unsplash License 使用）

與常規(guī)注射劑<0903>相比，<3903>的設(shè)計邏輯并非簡單地把所有限度收緊。普通注射劑進入體循環(huán)后，部分微?？杀幌♂尅⒎植蓟蛴删W(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除；眼內(nèi)注射則把微粒直接送入體積很小、相對封閉且與視網(wǎng)膜等精細組織鄰近的空間。玻璃體內(nèi)藥物常需長期重復注射，微粒暴露可能累積；較大顆粒還可能影響視軸或房水流出。因此，<3903>一方面采用至少4支合并、每次不少于1 mL的低裝量程序，避免為滿足大體積檢測而過度消耗或稀釋樣品；另一方面增加≥50 μm不超過2粒/mL及檢查用水不得含≥50 μm微粒的控制，突出對可能產(chǎn)生直接機械影響的大顆粒和背景污染的防范。其重點是“眼內(nèi)給藥風險的專屬性控制"，而不是在每一個粒徑段都嚴于<0903>。

針對上述檢測難點，眼內(nèi)注射劑對檢測設(shè)備的進樣體積、穩(wěn)定性及粒徑分辨能力提出了更高要求。因此，除滿足藥典規(guī)定外，還需結(jié)合樣品量小、組分復雜等特點選擇適宜的檢測系統(tǒng)。

在此背景下，AccuSizer A2000 USP的優(yōu)勢首先體現(xiàn)在低體積、可控體積進樣。其注射泵可處理約150 μL～25 mL的樣品體積，能夠以受控體積完成1 mL級進樣，并可在測試后回收樣品；這有助于減少珍貴樣品消耗并降低人工移液帶來的體積誤差。

圖4：AccuSizer A2000USP不溶性微粒分析儀

其次，AccuSizer采用單顆粒光學傳感（SPOS），對顆粒逐一計數(shù)和分級。其LE400傳感器標稱范圍為0.5～400 μm，具備多粒徑通道，可同時報告10、25、50 μm閾值及更完整的粒徑分布；相較只輸出少數(shù)閾值的傳統(tǒng)計數(shù)器，豐富的分布信息更有利于識別異常批次、清洗殘留或顆粒來源變化。

第三，設(shè)備具備支持21 CFR Part 11合規(guī)的安全管理和審計功能，并支持自動化報告，有利于審計追蹤、權(quán)限管理和結(jié)果復核。是否滿足企業(yè)數(shù)據(jù)完整性要求，仍取決于具體軟件版本、賬戶與權(quán)限配置、驗證狀態(tài)、備份策略和實驗室SOP。

• 實際檢測時建議重點控制以下環(huán)節(jié)：

1. 在潔凈環(huán)境中操作，驗證檢查用水或適宜溶劑，確認其中不得含≥50 μm微粒；同時將容器空白作為方法背景控制進行評估；

2. 進樣前輕柔混勻樣品，靜置2分鐘或適當時間充分脫泡，避免劇烈振搖、快速抽吸、反復推拉和不必要的超聲，以免引入氣泡、促進硅油脫落或誘導蛋白聚集；樣品置于取樣器后，應按照<3903>要求不加攪拌或轉(zhuǎn)動，避免檢測操作本身改變顆粒狀態(tài)；

3. 根據(jù)樣品黏度和儀器管路情況優(yōu)化取樣速度，注意區(qū)分氣泡產(chǎn)生的信號與真實顆粒，并確認不同黏度條件下進樣體積和輸送過程的穩(wěn)定性；

4. 用實際產(chǎn)品評估回收率、精密度、線性、攜帶污染、稀釋影響和容器間差異；

5. 固定并記錄針頭位置、管路材質(zhì)、沖洗體積和棄樣規(guī)則；

6. 高計數(shù)或異常粒徑分布出現(xiàn)時，復核空白、清潔度和氣泡，并采用顯微計數(shù)或流動成像調(diào)查顆粒形態(tài)與來源；

7. 對于預灌封或轉(zhuǎn)移注射器產(chǎn)品，將振動、硅油遷移和貨架期納入方法開發(fā)與穩(wěn)定性研究。

<3903>的意義，不只是增加了一個檢驗項目，而是把眼內(nèi)注射劑的顆?？刂茝摹把赜闷胀ㄗ⑸鋭┮?guī)則"推進到“圍繞眼內(nèi)給藥真實風險建立專屬標準"。對于企業(yè)而言，合規(guī)的終點也不應只是獲得一次合格的粒子計數(shù)結(jié)果，而應建立貫穿處方、工藝、包材、給藥器械、運輸和貨架期的顆粒風險控制策略。AccuSizer A2000 USP在微量體積控制、寬粒徑分布和自動化數(shù)據(jù)管理方面能夠為<3903>檢測提供有效工具；但設(shè)備能力只有與產(chǎn)品特異的方法驗證、嚴格的背景和氣泡控制、異常顆粒的正交鑒別，以及容器—藥物相容性研究結(jié)合起來，才能真正轉(zhuǎn)化為對患者視力安全的保障。隨著眼內(nèi)生物藥、長效制劑和新型給藥系統(tǒng)持續(xù)發(fā)展，未來質(zhì)量控制也將從單一閾值的合格判斷，逐步走向?qū)︻w粒來源、演變機制和臨床風險的系統(tǒng)認識。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會. 2025年版《中國藥典》四部通則<3903> 生物制品眼內(nèi)注射劑不溶性微粒檢查法.

[2] 國家藥典委員會. 2025年版《中國藥典》四部通則<0903> 不溶性微粒檢查法.

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